CAR-T疗法在制备过程中需要用到慢病毒将质粒转染入T细胞,由于慢病毒以及质粒会随CAR-T细胞进入病人体内,因此用于CAR-T疗法的质粒必须满足GMP级别标准。
质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体(或拟核)以外的DNA分子,存在于细胞质中(但酵母除外,酵母的2 μm质粒存在于细胞核中),具有自主复制能力,使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息,是闭合环状的双链DNA分子。游离型质粒随着宿主菌染色体复制而复制,并随细胞分裂分离到子代细胞中。
新思界产业研究中心整理发布的《2021-2025年中国质粒DNA市场可行性研究报告》显示,根据质粒能否通过细菌的接合作用,可分为接合性质粒和非接合性质粒。接合性质粒带有与接合传递有关的基因。非接合质粒在一定条件下通过与其共存的接合质粒的诱动或转导而传递。根据质粒在细菌内的复制类型可分为严紧控制型和松弛控制型。
质粒是小型环状DNA分子,在基因工程中作为最常用,最简单的载体,必须包括三部分:遗传标记基因,复制区,目的基因。质粒可以直接被应用于人体,例如质粒DNA疫苗、基因治疗、免疫增强剂、CAR-T,也可以用于对细胞的基因工程改造生产重组蛋白等生物医药产品。质粒DNA的生产过程主要由质粒DNA的构建、细胞库的建立、发酵生产、细胞溶解、离心收集、过滤提纯和分装出产构成。
质粒DNA可以分为GMP级质粒和非GMP级质粒,其中非GMP级质粒占质粒市场的90%。当质粒被直接用于人体时(包括在CAR-T技术中的应用),为了对人体的危害降到最低,要采用GMP级别的生产规范;当质粒仅用于体外转染细胞时,质粒DNA的生产可以是HQ级别的生产规范。GMP级别质粒可应用于在CAR-T疗法。CAR-T疗法在制备过程中需要用到慢病毒将质粒转染入T细胞,由于慢病毒以及质粒会随CAR-T细胞进入病人体内,因此用于CAR-T疗法的质粒必须满足GMP级别标准。
新思界行业分析人士表示,目前,国内的质粒DNA主要包括进口和国产两大类,其中进口品牌主要为赛默飞世尔、思拓凡、德国赛多利斯、默克等几大全球生命科学巨头,国内企业这主要为南京金斯瑞科技有限公司。南京金斯瑞科技有限公司于2018年11月在国内建成按照美国欧洲中国cGMP要求设计建设的质粒GMP车间,用于临床前和临床I-II期质粒样品生产,拥有5L-100L不锈钢发酵罐生产线,和10L-50L一次性生物反应器生产线。基于工艺流程的车间管理系统与严格的质量管理体系,保证了质粒产品的安全性与稳定性。
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